怎樣正確的復(fù)蘇細(xì)胞
細(xì)胞凍存好了，接下來(lái)要注意什么問(wèn)題呢?沒(méi)錯(cuò)，就是記得到時(shí)間了，拿出來(lái)復(fù)蘇。那么，細(xì)胞復(fù)蘇的過(guò)程中又有哪些該注意的事項(xiàng)呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?不羅嗦了，請(qǐng)看下文：
活力檢查 – 千萬(wàn)不要使用不健康的細(xì)胞，可能有污染(真菌、支原體等)，如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查 – 檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長(zhǎng)行為。
凍存細(xì)胞：
補(bǔ)充新的培養(yǎng)液 – 在您開(kāi)始凍存細(xì)胞的前一天補(bǔ)充新的培養(yǎng)液。
在細(xì)胞長(zhǎng)至70%單層時(shí)收獲細(xì)胞，計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度 ~5 x106 cells/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整)
凍存液 – 用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞，有不同類型的凍存液，根據(jù)細(xì)胞類型選擇zui合適的凍存液(常用的凍存液成分有):
– 5-10% DMSO – 注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì)。
– 5-15% 甘油
– 如果細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)，應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)24小時(shí))內(nèi)凍存和復(fù)蘇。
在凍存管上標(biāo)記好細(xì)胞類型，日期，凍存人等信息，并保證每?jī)龃婀懿怀^(guò)1.5ml。
程序降溫是保證凍存細(xì)胞活性的關(guān)鍵，使用 Mr. Frosty(找生物注一種裝置)保證降溫速度為1°-3°C，置于-80°C冰箱內(nèi)過(guò)夜，如果沒(méi)有Mr. Frosty裝置，可以使用實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的泡沫盒、棉花等
放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以zui快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi)，因此，此步驟使用干冰，或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意，在凍存管上沒(méi)有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息，做好記錄是非常非常重要的!
細(xì)胞復(fù)蘇只是一個(gè)簡(jiǎn)單的實(shí)驗(yàn)，不過(guò)這其中卻不可避免有一些需要注意的細(xì)節(jié)，不然，也不一定會(huì)盡如人意。例如說(shuō)，人身健康方面：一定要記得做好防凍工作，戴上護(hù)目鏡;盡量降低DMSO對(duì)細(xì)胞的損傷等等。
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