在優(yōu)化免疫學(xué)反應(yīng)前提后，建立了克百威間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法和直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法，檢測(cè)限分別為0.005mg／L和0.01mg／L，檢測(cè)線性范圍分別為0.005～10mg／L和0.01～10mg／L，并在此基礎(chǔ)上研制了兩種用于檢測(cè)水、泥土、蔬菜、中毒樣品的酶聯(lián)免疫試劑盒，人ELISA試劑盒其ELISA試劑盒的重現(xiàn)性好，批內(nèi)批間及整體變異系數(shù)均低于8.0％，試劑盒檢測(cè)的正確度高，除嘔吐物樣品外，其余樣品的回收率均在89.62％以上。
本研究以2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃氯甲酸酯為基礎(chǔ)合成了克百威的兩種半抗原，6—[[（2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基氧）羰基]氨基]已酸（BFNH）和4—[[（2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基氧）羰基]氨基]丁酸（BFNB）。 用合成的克百威免疫原免疫兔子后獲得價(jià)、高特異性的抗克百威多克隆抗血清，用間接ELISA測(cè)定效價(jià)為1：16000～1：128000，純化抗體效價(jià)為1：500000～1：4000000。并選擇由BFNB-BSA免疫兔子所得的一種純化抗體與辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)制備成酶標(biāo)抗體，人ELISA試劑盒同時(shí)了測(cè)定了酶標(biāo)抗體的活性，效價(jià)為1：4000。所得克百威多抗血清與丁硫克百威的交叉反應(yīng)率6.19％，與呋喃酚的交叉反應(yīng)率為4.00％，與供試的其它5種氨基甲酸酯類(lèi)的交叉反應(yīng)率均小于0.44％，對(duì)于三種有機(jī)磷的交叉反應(yīng)率均低于0.12％。 同時(shí)，根據(jù)抗體抗原的特異性結(jié)合反應(yīng)的原理，進(jìn)一步研究了抗克百威抗體對(duì)小鼠克百威中毒后的解毒作用，試驗(yàn)結(jié)果表明，抗體可以較好地緩解克百威對(duì)乙酰膽堿酯酶按捺作用的癥狀，人ELISA試劑盒使中毒小鼠逐漸恢復(fù)正常。同時(shí)將這兩種半抗原與載體蛋白牛血清蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶聯(lián)合成克百威免疫原和包被抗原，并用紫外光譜法測(cè)定克百威與載體蛋白結(jié)合物結(jié)合比。
上海通蔚生物科技有限公司
地址：上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號(hào)3463室
主營(yíng)產(chǎn)品：酶聯(lián)免疫試劑盒，食品農(nóng)殘檢測(cè)，細(xì)胞系，培養(yǎng)基，胎牛血清
©2019 版權(quán)所有：上海通蔚生物科技有限公司 備案號(hào)：滬ICP備14033764號(hào)-3 總訪問(wèn)量：1258117 站點(diǎn)地圖 技術(shù)支持：環(huán)保在線 管理登陸
